多基因串联发酵木糖产乙醇重组菌株构建初探

[目的]解决酿酒酵母不能发酵或利用木糖的问题,以期选育出高效转化秸秆生产乙醇的菌株.[方法]将来自近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)的木糖还原酶基因(xyl1),热带假丝酵母(Candida tropicalis)的木糖醇脱氢酶基因(xyl2),树干毕赤酵母(Pichia stipitis)的木酮糖激酶基因(xks1),以及酿酒酵母内源的转醛酶基因(tal1)和转酮酶基因(tkl1),通过串联共表达的方法构建到表达载体pAUR123上,构建了一株重组酿酒酵母.[结果]经过酶活性分析和Western blot蛋白免疫实验,证明转化子pAUR123-XL成功导入酿酒酵母并得到表达.以木糖为唯一碳源进行限氧发酵,能稳定利用木糖,木糖发酵结果表明:木糖的利用率为79.5％,乙醇产率为31％.[结论]构建的重组菌株能较好的利用木糖,为进一步的乙醇发酵提供了依据.
[目的]探讨酿酒酵母YSI-3.7在富集Cr([Ⅲ)形成葡萄糖耐量因子(GTF)过程中自身抗氧化机制以及硫在该过程中发挥的作用,以期揭示硫对降低铬胁迫,进而提高生物富铬的作用机理.[方法]以高产GTF酿酒酵母YSI-3.7为目的菌株,通过设置不同浓度的Cr(Ⅲ)、硫组合进行生物富铬,测定不同条件下YSI-3.7菌株的生物富铬量以及相应氧化应激指标(如丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)等)的变化,分析硫对酵母菌体在Cr (Ⅲ)胁迫下的改善作用.[结果]低浓度Cr (Ⅲ)(200 μg·mL-1)会刺激酵母YSI-3.7生长,使其生物量增加;而高浓度Cr (Ⅲ)(＞500 μg·mL-1)对酵母生长有抑制作用.Cr(Ⅲ)浓度为500 μg·mL-1时,酵母中有机铬含量为(725.55±55.08)μg·g-1DCW,总铬含量达(1 255.53±43.75)μg·g-1 DCW;Cr(Ⅲ)浓度为800 μg·mL-1时,有机铬为(536.25±36.89)μg·g-1 DCW,其中,总铬含量达(1 812.22±38.24)μg·g-1 DCW.随Cr (Ⅲ)浓度的增加(0-800 μg·mL-1),菌体中MDA含量从11.83 nmo 1·mL-1升高到18.04 nmol·mL-1.SOD和CAT活力随Cr (Ⅲ)浓度升高而降低.在较低Cr(Ⅲ)浓度(≤500 μg·mL-1)下,谷胱甘肽(GSH)、总巯基、总抗氧化能力(T-AOC)含量均升高,但在高浓度Cr(Ⅲ)(800μg·mL-1)下会降低.1 mmol·L-1 Na2SO3可以缓解Cr(Ⅲ)的胁迫作用,此时,酵母中蛋白质含量上升,MDA含量降低12.83％,CAT活力基本无影响,SOD活力提高4.41％,GSH、T-AOC、GSH-Px含量分别增加28.83％、14.29％和18.80％.[结论]酵母富铬过程中,Cr (Ⅲ)胁迫作用可造成酵母膜脂过氧化程度加重.在较低铬浓度时(≤500μg·mL-1),酵母可以通过自身抗氧化酶系统缓解该胁迫作用,其中发挥重要作用的是谷胱甘肽及其相关酶.高浓度Cr(Ⅲ)(800 μg-mL-1)下,膜脂过氧化程度进一步加重,酵母自身抗氧化能力不足以抵御Cr (Ⅲ)胁迫.硫(1 mmol·L-1Na2SO3)可以通过提高酵母中SOD活力、GSH、T-AOC、GSH-Px含量,减轻Cr (Ⅲ)造成的膜脂过氧化程度,提高酵母自身抗氧化能力,进而提高酵母生物富铬效率.
本实用新型提供了一种高效白酒瓶吹干装置，置于风淋机内，设置网状转盘由电机驱动可转，风淋机的多个热风管道的出风口分别正对网状转盘的上、下端，网状转盘的上方设有白酒瓶输送机构，白酒瓶输送机构的输入传送带与输出传送带之间通过环形通道相衔接，形成白酒瓶输送轨迹，环形通道置于网状转盘的正上方、与网状转盘的上端面之间留有间隙、外径与网状转盘的直径相匹配，输入传送带是沿环形通道的切线方向布设、末端与环形通道的外缘相衔接连通，输出传送带的首端与环形通道的外缘相衔接连通，环形通道内、位于输出传送带临近输入传送带的一侧设有挡板。本实用新型可对洗瓶灌装后的白酒瓶全方位地吹干，提高生产效率、节约生产空间与资源。
为了利用转基因技术在酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中生产二十二碳六烯酸(DHA,22∶6A4,7,10,13,16,19n-3),构建了同时含C20-△5脂肪酸碳链延长酶(TFD5)和C22-△4脂肪酸碳链脱饱和酶(FAD4)基因的共表达质粒pYTFD5-FAD4.该质粒是通过基因重组的方法,使脂肪酸碳链延长酶与脱饱和酶基因置于各自启动子和终止子下获得的.共表达质粒pYTFD5-FAD4转化酿酒酵母所得到基因工程菌,在添加终质量分数为2%的半乳糖,终体积分数为1%的NP-40和0.3 mmol/L的底物二十碳五烯酸(EPA,20∶5△5,8,11,14,17n-3)下进行诱导,可直接转化二十碳五烯酸(EPA,20 ∶ 5△5,8,11,14,17n-3)生成二十二碳五烯酸(DPA,22 ∶ 5△4,7,10,13,16n-3)和二十二碳六烯酸(DHA,22 ∶ 6△4,7,10,13,16,19n-3).
垦啤麦7号(红99-407)属春性二棱啤酒大麦品种.由黑龙江省红兴隆科研所用Ant90-2做母本,红92-25做父本经有性杂交育成.2004年2月20日通过黑龙江省品种审定委员会审定.该品种经2002～2003两年区、生试,平均公顷产量分别为4405.25kg和3713.2kg,分别比对照增产11.53%和12.65%.与此同时,经连云港全国麦芽检测中心两年化验,平均蛋白质含量11.35%,比垦啤麦3号低1.42%;麦芽无水浸出率82.65%,比垦啤麦3号高3.2%,属优质品种.垦啤麦7号的育成无论是产量和品质都比垦啤麦3号有新的突破.其是代替垦啤麦3号的首选品种,推广该品种会给黑龙江啤酒大麦基地品质上一个新的台阶.
本发明公开了一种酱香型白酒的制备工艺，包括下沙、糙沙及发酵蒸酒步骤，其中，在第2至第7轮次蒸馏取酒时，按比例在传统酒醅中加入强化酒醅，强化酒醅发酵时的温度和用曲量都和传统发酵不同，所制得的酱香型白酒降低了对人体有害的物质的含量，提高酱香酒中有益健康成份，并经实验证明在相同酒精度的前提下可比其他白酒多喝30％而不醉，即使喝醉，酒醒后也不会出现异常感觉如头疼等症状，不诱发肠炎。并且白酒的酱香突出，优雅细腻，酒体醇雅，回味悠长，空杯留香持久。