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菟丝子炮制前后化学成分的比较研究

目的:本课题围绕菟丝子炮制前后化学成分变化进行比较研究,并对菟丝子盐制品和酒制品炮制技术及菟丝子质量标准进行规范化研究。研究使用的菟丝子药材来源为旋花科植物菟丝子CuscutachinensisLam.的干燥成熟种子。本实验主要是通过比较研究菟丝子炮制前后总成分和单一成分变化,确定菟丝子饮片炮制前后化学成分的改变,探讨菟丝子的炮制原理;根据不同炮制方法及炮制工艺对其化学成分的影响,筛选出盐制和酒制工艺,初步建立菟丝子饮片质量标准;建立盐制菟丝子饮片HPLC指纹图谱,并对炮制前后的变化进行对比研究;为菟丝子酒制、盐制炮制规范化提供实验数据,为中医临床正确应用菟丝子炮制品提供依据,从而提高和保证饮片质量,保证临床用药安全有效。
  方法:采用紫外分光光度法,以提取温度,提取溶剂用量,提取时间为因素,选取不同水平,分别以总黄酮,总多糖为指标,筛选出提取条件,测定菟丝子盐制品与酒制品不同烘制温度,烘制时间,闷润时间,以及酒制品不同黄酒用量中总黄酮,总多糖的含量;采用高效液相法,确定菟丝子中槲皮素的提取方法,测定菟丝子盐制品与酒制品不同烘制温度,烘制时间,闷润时间,以及酒制品不同黄酒用量中槲皮素的含量,比较不同炮制因素对菟丝子盐制与酒制品中总成分与单一成分含量的影响;以烘制温度,烘制时间,闷润时间为因素,选取不同水平,以槲皮素为指标,筛选出盐制与酒制炮制条件,从而优选出菟丝子盐制与酒制炮制工艺;采用HPLC法建立盐制菟丝子饮片指纹图谱;比较菟丝子生品、盐制菟丝子、酒制菟丝子、炒黄菟丝子和水煮菟丝子指纹图谱在峰位置、数量及峰面积上的区别;以乙醚为提取溶剂,测定菟丝子生品、盐制菟丝子、酒制菟丝子、炒黄菟丝子和水煮菟丝子脂肪油含量;按照药典法测定菟丝子生品与其炮制品水分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物;采用HPLC法建立测定菟丝子中酚酸类成分绿原酸,黄酮类成分金丝桃苷、芦丁、槲皮素和山奈素5种单一成分含量的方法,比较生品与不同炮制品中5种成分含量的变化。
  结果:通过正交试验筛选出菟丝子总黄酮提取工艺为85℃水浴用95%乙醇40ml水浴回流提取2次,每次提取2h;总多糖的提取工艺为100℃水浴加水30ml水浴回流提取2次,每次3h;不同炮制因素对菟丝子总黄酮、总多糖、槲皮素的含量均有影响,菟丝子炮制后总黄酮含量下降,总多糖和槲皮素含量明显升高,炮制温度与其它炮制因素相比更为显著;菟丝子盐制工艺为闷润1h,放入烘箱160℃烘制60min;酒制工艺为每100g菟丝子药材加入30ml黄酒闷润1h,放入烘箱160℃烘制60min;菟丝子炮制后在峰保留时间、峰数目上没有太大改变,但在峰面积上有一定的变化,盐制,酒制与炒黄后酚酸类成分和黄酮类成分峰面积比生品峰面积明显降低,但其中槲皮素与山奈素峰面积明显升高。水煮后酚酸类成分与黄酮类成分峰面积与生品相比降低不多,且槲皮素与山奈素峰面积升高也不明显;菟丝子饮片水分含量均不超过9.0%;水浸出物的含量均不超过29.0%,醇浸出物的含量均不超过14.0%;生品中脂肪油平均含量为5.97%,炮制后菟丝子脂肪油的平均含量在5.21%~6.61%之间;绿原酸、金丝桃苷、芦丁、槲皮素和山奈素的含量生品中平均含量为2.11mg/g、2.35mg/g、0.55mg/g、0.04mg/g、0.13mg/g,盐制品中平均含量为0.86mg/g、0.90mg/g、0.31mg/g、0.55mg/g、0.27mg/g,酒制品中平均含量为0.80mg/g、0.77mg/g、0.30mg/g、0.49mg/g、0.23mg/g,清炒品中平均含量为1.06mg/g、0.92mg/g、0.31mg/g、0.49mg/g、0.19mg/g,水煮品中平均含量为1.43mg/g、1.68mg/g、0.40mg/g、0.06mg/g、0.29mg/g。
  结论:炮制的程度与药材中有效成分的含量相关;菟丝子炮制后发现化学成分的含量发生了明显改变,首次发现菟丝子炮制对槲皮素含量有显著影响;菟丝子不同炮制品槲皮素含量与烘制温度和烘制时间呈正相关,炮制能提高槲皮素的含量;首次以槲皮素为指标确定菟丝子盐制和酒制工艺;菟丝子生品不易粉碎且煎出率较低,而盐制,酒制后槲皮素含量增加,槲皮素具有保肝,保肾作用,炮制增强其滋补肝肾,明目作用,临床应用宜选用制品;水煮品与生品比较无明显差异,但水煮增加有效成分的溶出,临床常以水煮品代替生品;首次建立采用HPLC法同时测定菟丝子中5种有效成分的方法,方法准确,简便,重现性好。

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