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影响多步脱氢酶CrtI功能的关键结构特征探索

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2023-06-16 阅读:408
在生物体内存在可催化多步连续反应的通用酶,对生物代谢过程具有重要作用.八氢番茄红素脱氢酶(CrtI)作为典型代表,可以催化多步连续脱氢反应,生成番茄红素等具有重要价值的产物.本文以酿酒酵母为底盘研究CrtI的催化功能特征.首先通过组合设计与筛选番茄红素合成路径中的三种外源酶CrtE、CrtB和CrtI,发现CrtI是主要的限制因素,且三孢布拉氏霉菌来源的CrtI (BtCrtI)表现出优异的催化功能.通过生物信息学与蛋白结构分析发现BtCrtI的S311残基是连接和稳定活性中心结构的关键.随后通过分析该位点的饱和突变结果,揭示了该位点的氨基酸残基类型对活性中心结构和功能的显著作用,为酶的设计和改造提供了新的思路.同时发现CrtI的活性差异未对合成路径中的类胡萝卜素的代谢流造成扰动,表明CrtI是番茄红素的产量和纯度的决定因素.
对啤酒酵母中β-(1,3)-D-葡聚糖(用碱-酶法从啤酒废酵母中提取)的水解条件进行了优化.研究表明影响β-(1,3)-D-葡聚糖水解条件的因素顺序依次为:预水解硫酸浓度>水解温度>水解硫酸浓度>水解时间;水解参数为:预水解硫酸浓度12mol/L、水解硫酸浓度2mol/L、水解温度100℃、水解时间24h.此条件下用苯酚-硫酸法测得的β-(1,3)-D-葡聚糖含量为83.1%.
为分离筛选酿酒用功能产香酵母菌株,采用稀释涂布分离培养方法,从古井贡酒曲中分离得到6株酵母菌(Y1401,Y1501,Y1506,Y1507,Y1605,Y1801).通过菌落形态特征、细胞显微结构、生理生化特性,结合26SrDNA序列测定和系统发育分析对其鉴定,确定Y1401和Y1507为异常威克汉姆酵母,Y1501、Y1506、Y1605和Y1801为扣囊复膜酵母.通过微生物学特性分析发现,Y1401具有较好的NaC1耐受性,而Y1507能耐受14%的乙醇.除Y1801在豆芽汁产香培养基中仅产生6种风味物质外,其它酵母能产生多种风味物质,并以酯类物质最多.由此可见,筛选到的酵母在白酒酿造过程中具有增强其风味物质的应用潜力,是白酒生产中的重要菌种资源.
本发明提供一种弱碱性白酒及其生产方法。其中弱碱性白酒外观无色透明或微黄透明,香气幽雅,口味纯净,pH值为7.0~8.5,制酸指数≤3.5,总有机酸根含量≤10mmol/L。生产方法为:以半成品或成品白酒为原料,采用蒸馏的方法部分或全部去除白酒中的酸类物质,从而降低原料酒的酸度,提高原料酒的pH值;然后采用pH值>7.0的弱碱性饮用水降度,使酒体pH调整到值7.0~8.5,呈现弱碱性。本发明提供了一种新的弱碱性白酒及其生产方法。
本发明公开了剑蚕草的新用途,即用于制作菜香型白酒的用途,还公开制作菜香型白酒的方法,它包括以下步骤,清洗,榨汁,过滤,脱异味,消毒灭菌,配兑。可制成含剑蚕草汁液15-30%,酒精36-59。的菜香型白酒。该酒含有大量对人体有益的维生素,氨基酸,浅黄棕色,清澈透明,具有独特的菜香风味。
本发明公开了一种菠萝白酒酿造方法,用切片机除去菠萝皮芯,菠萝果肉用旋转式破碎机破碎;往破碎液中加入纤维素分解酶,使纤维分解成可发酵性糖,所用纤维素分解酶是普通的纤维素酶,每1千克破碎液的用酶量为1克,酶处理条件为30℃,24小时;将啤酒酵母进行预培养,培养好的培养液用于发酵,在室温下发酵5天,当糖度降到1%-2%时停止发酵;发酵结束后,用过滤法除去发酵液中的沉淀杂质,进行后熟,酒精度为8%,菠萝酒的得率为破碎液的60%;将菠萝酒进行蒸馏,制得酒精度为40%的菠萝白酒的菠萝酒。生产方法简单,保留了菠萝原有的风味,具有较高的营养价值,便于保存,避免了浪费。

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