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坛紫菜hsp70基因真核表达载体的构建与转化

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2023-06-30 阅读:477
坛紫菜是极具经济效益的大型海藻,生活在环境多变的潮间带,易受到温度、渗遗压和辐射等因素剧烈变化的影响,经常处于逆境胁迫中.热休克蛋白70(HSP70)是生物体内一种重要且高度保守的应激因子,作为分子伴侣在胁迫条件下首先被诱导出来,在逆境胁迫调节中起着重要的作用.构建紫菜hsp70基因真核表达体系对于了解该基因在紫菜抗逆过程中的作用有重要意义.利用PCR技术扩增得到大小为1.89 kb的坛紫菜hsp70基因,将其克隆至pMD18-T载体上测序.从测序正确的菌株中提取质粒,经限制性内切酶Sma Ⅰ和Not Ⅰ进行消化,将目的基因与真核表达质粒p181AINE连接,获得重组真核表达质粒p181-hsp70.通过菌落PCR、双酶切及测序等方法进行鉴定,结果表明重组真核表达质粒p181-hsp70构建成功.制备酵母感受态,将重组质粒电激转入酿酒酵母中,酵母菌落PCR结果显示电激转入成功.
在模拟葡萄汁培养基中以三种非酿酒酵母(葡萄汁有孢汉逊酵母、美极梅奇酵母、浅白隐球酵母)为实验对象,以酿酒酵母DV10为对照,研究三种非酿酒酵母的生长特性和发酵香气.结果表明:葡萄汁有孢汉逊酵母的生长特性最好,其次是美极梅奇酵母;不同酵母发酵模拟培养基共检测出74种与酵母代谢相关的挥发性化合物,其中醇类13种,酯类29种、酸类9种、醛酮类5种、萜烯类8种、苯环类6种和其他类4种;不同酵母菌发酵的培养基中的香气成分及含量差异明显,美极梅奇酵母产生的发酵香气浓度最高(206.27 mg/L),其中有玫瑰花香的苯乙醇(102.49 mg/L)对香气的贡献最大,另一重要香气物质为3-甲基丁醇(86.65 mg/L);浅白隐球酵母典型的发酵香气为金合欢醇(0.13 mg/L),给葡萄酒带来柔和的甜香气;葡萄汁有孢汉逊酵母能够产生较为丰富的香气物质,典型的发酵香气为乙酸乙酯(5.86 mg/L)、乙酸-3-甲基丁酯(1.17 mg/L)、辛酸乙酯(25.01 mg/L)、辛酸-3-甲基丁酯(0.3 mg/L)、乙酸-2-苯乙酯(14.36 mg/L)、辛酸(1.96 mg/L)和香茅醇(0.21 mg/L),赋予葡萄酒复杂的果香和花香.在葡萄酒酿造中应用特定的非酿酒酵母进行发酵,可以用来生产有特定风味的葡萄酒.
马齿苋经榨汁、护色、离心得到马齿苋提取液;大米蒸煮、冷却、糖化后与马齿苋提取液共同发酵得到色泽浅黄、醇厚丰满、风味独特的马齿苋米酒.研究不同发酵条件对马齿苋米酒的品质影响,优选出的最佳发酵工艺为:马齿苋提取液15%、甜酒曲1.0%、酿酒酵母0.1%、发酵120小时.
根据前期研究结果,制定了赤霞珠的生态区划指标体系.采用逐步分区法和集优法相结合的方法,在GIS技术的支持下,开展了中国北方赤霞珠葡萄的精细化生态区划研究,制作了区划图.结果表明,中国北方赤霞珠葡萄生态区可划分为最适宜区、适宜区、次适宜区、不适宜区和不可种植区5类.作为中晚熟品种的赤霞珠葡萄,其最适宜生态区在中国北方呈零星分布,面积较小,并且主要分布在西北地区.适宜生态区的分布较为广泛,西北、华北、东北和中原地区均有分布,涵盖了目前北方主要的酿酒葡萄产区.在进行赤霞珠葡萄的原料基地建设布局时,要重点考虑在最适宜区和适宜区发展,有条件地选择在次适宜区发展,尽量避免建在不适宜区和不可种植区.本研究结果可为中国北方酿酒葡萄产业规划、酿酒葡萄基地建设布局提供参考.
本发明公开了一种白酒酿造工艺,解决现有技术中甲醇和乙酸乙酯含量较高的问题。一种白酒酿造工艺,其特征在于,包括以下步骤:(1)泡粮,用山泉水将粮食完全淹没,浸泡6~8个小时;(2)熟化,将泡过山泉水后的粮食平铺,104℃~109℃蒸40min;(3)吃水,用温度为80℃~100℃的热水再次浸泡步骤(2)中的粮食,直至粮食吃透水,浸泡时间为40min;(4)排水再蒸;将步骤(3)中的水排出,再次进行时长50min,107℃的蒸粮;(5)冷却;将粮食冷却至常温,如有必要,可选择用风机帮助冷却;(6)发酵;(7)将经过步骤(6)后的产物蒸馏出酒。通过上述技术方案,本发明很好的解决了现有技术中的问题。
葡萄原料成熟度的确定,对葡萄的采收和酿造最佳品质的葡萄酒具有重要意义.本文主要研究了河西走廊祁连葡萄庄园酿酒红葡萄西拉,美乐在成熟过程中总糖、总酸、pH值、果皮单宁、色素的变化.结果表明,西拉、美乐葡萄在进入成熟过程中总糖、果皮单宁、色素含量变化呈现"S"型曲线,总酸随糖度积累持续下降,pH值持续上升,总糖、果皮单宁、色素含量达到顶值,葡萄成熟度最好,即可确定采收期.

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