mleA基因在酿酒酵母中的整合型表达

[目的]进行中国自行筛选的专利菌种酒酒球菌SD-2a(Oenococcus oeni SD-2a)的苹果酸-乳酸酶基因在酿酒酵母中的整合型表达,使葡萄酒生产过程中的酒精发酵和苹果酸-乳酸发酵(malolactic fermentation,MLF)同时进行. [方法]克隆Oenococcus oeni SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因mleA,以PGK1强启动子和ADHl终止子为调控元件,以酵母整合型质粒YIp5为载体,构建重组表达质粒pYILmleA,并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS59,经筛选鉴定获得酵母转化子YS59/pYILmleA.进行转化子的营养缺陷型和交配型鉴定、菌落PCR鉴定、SDS-PAGE检测及斑点杂交检测,并对酵母转化子培养上清液进行L-苹果酸及L-乳酸含量的HPLC分析,检测目的基因的功能性表达.[结果]转化子的营养缺陷型和交配型鉴定、菌落PCR鉴定表明获得了阳性转化子;SDS-PAGE检测表明获得的转化子表达了目标蛋白,斑点杂交检测表明目的基因整合到受体菌中.模拟发酵表明mleA基因整合到受体菌中后进行了功能性表达,将培养基中的L-苹果酸转化成L-乳酸,使得培养液中的L-苹果酸含量极显著降低.转化子YS59/pYILmleA在添加5 648 mg·-1 L-苹果酸和10%葡萄糖的SD/-Ura培养基中培养4 d,培养液上清中L-苹果酸的剩余含量与空载体转化子YS59/YIp5(对照)差异极显著,苹果酸的相对降低率为20.18%-20.85%.供试的转化子L-乳酸生成量为1 278～1 312 mg·L-1,对照未检出乳酸的生成.[结论]中国自主筛选的专利菌种O.ocni SD-2a的mleA基因的整合型表达质粒构建成功并在酿酒酵母中进行了功能性表达.
一种新的酿制合成白酒的方法，其特点在于省去了酿时复杂的工艺，直接用酒精加白酒专用香精，专用陈化剂，增香剂、若干调味剂配制而成。用本发明方法酿制合成的白酒香味俱佳，比同类优质名牌白酒质量更好。用本发明方法酿制合成白酒，可以大大节约粮食，简化生产工艺，降低劳动强度，提高产品产量降低成本，因而本发明方法具有可观的应用前景。
本实用新型涉及白酒生产领域，公开了一种露天罐区用白酒储罐。该露天罐区用白酒储罐，包括罐体，其特征在于，在罐体的顶部设置有防晒水喷淋环，在罐体的侧壁底部设置有防晒水回收槽，所述防晒水回收槽和防晒水喷淋环之间设置有循环泵。本实用新型在罐体上设计防晒水喷淋与回收的装置，使露天罐区用白酒储罐定型化、成套化、规范化；防晒水循环利用，既改善罐区的操作环境，又减少水资源的浪费，能够达到节能减排的目的。
磷酸果糖激酶(PFK)是糖酵解途径的重要调控酶.以酿酒米曲霉CICC2012为材料,克隆获得PFK基因pfkA(GenBank登录号:KC113503.1).序列分析表明:pfkA序列长度为2 722 bp,含有2个内含子,开放阅读框长2 358 bp; PFK为785个氨基酸组成的亲水蛋白,分子量86.0 kDa,等电点6.38,含有2个PFK家族指纹结构；二级结构包含42.68％的α-螺旋,14.27％的β-折叠和43.06％的无规则卷曲；同源建模三级结构PFK含有N端和C端的2个结构域,底物果糖-6-磷酸结合于N端结构域.采用进化树分析,发现米曲霉PFK与丝状真菌PFK亲缘性较近.
本文对5个优良酿酒葡萄品种和4种砧木嫁接组合的愈合性及生根率进行研究,结果发现,砧木品种101-14对试验的5个葡萄品种均具有较好的愈合性和生根率,是嫁接生产苗木的首选砧木品种,其次是砧木品种5BB,而SO4的表现相对较差.
一种水果白酒的酿制方法，是将经前处理后的水果用机器或人工粉碎，得水果原料然后依次加入稻壳、水和糖化酶水溶液，加入量为每100kg水果料加入5-6kg稻壳、10-15kg水和2500-2900g糖化酶水溶液，并搅拌均匀，得酒料；糖化酶水溶液的配制方法是：取50000单位糖化酶500-550g加入2000-2200g的30-40℃的水，浸泡30分钟，再制得的酒料放入发酵池或下窖，进行自然发酵，下窖时窖温为10-20℃，自然发酵时间为30-40天，然后蒸馏，既得。采用本发明方法制备水果白酒，减少了很多工序，降低了成本，酒的质量高、口感好，同时也解决了果农们的等外果和不好储存果的销路。