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拟康氏木霉eg1基因的克隆及在酿酒酵母中的分泌表达

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2023-06-01 阅读:409
从拟康氏木霉3.3002基因组中克隆了内切葡聚糖酶EGI基因,该基因全长1566 bp,由3个外显子2个内含子组成,编码461个氨基酸.编码蛋白EGI的N端为22aa组成的信号肽,其后依次为催化结构域、连接肽和结合结构域.采用重叠PCR法获得无内含子的内切葡聚糖酶基因eg1,并将其成熟肽编码序列插入酿酒酵母分泌型表达载体pYEα中,构建成pYEα-Peg1重组质粒,转化酿酒酵母.重组转化子经β-半乳糖诱导,检测表达产物的分子大小以及酶活,结果表明,转化子在刚果红平板上可产生明显的水解圈;酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EG I并分泌到胞外;SDS-PAGE电泳显示EGI蛋白分子量比预期目的蛋白稍偏大.
烟气再循环作为一种有效抑制NOx生成的技术,广泛应用于化工、制药和酿酒等行业的天然气低氮燃烧过程,其作用机理是学术界和工业界关注的热点.本文根据内/外烟气再循环的作用不同,设计了弱/强内烟气再循环两种扩散式燃烧器,结合外烟气再循环技术,在0.8MW中试实验台上研究了内/外烟气再循环对天然气燃烧过程NOx生成的影响规律,同时开展了Fluent数值模拟.结果表明:内烟气再循环能够有效抑制NOx的生成,同时保证燃烧稳定.相同工况下,带内烟气再循环燃烧器初始排放远低于传统低氮燃烧器.同时结合外烟气再循环技术,可使NOx排放量维持在30mg/m3以下.Fluent模拟结果显示了外烟气再循环能够显著地降低天然气燃烧火焰区的温度和O2浓度.其中温度的降低对于NOx生成的抑制起到了决定性的作用.当NOx降低到约30mg/m3时,快速型NOx对整体NOx生成的贡献超过热力型NOx,此情况下必须考虑对快速型NOx进行抑制.
对乳酸链球菌和酿酒酵母菌进行混合培养发酵,通过讨论溶氧、温度、pH值、接种量、接种比例和培养基对其发酵结束时活菌数的影响,确定两种菌在前期28℃摇床150 r/min培养24 h,后期37℃静置24 h,初始pH为7.5,接种量为0.5%,接种比例乳酸菌∶酵母菌为1%∶0.5%,培养基为YEPD时,两者的活菌数水平达到最高值,乳酸菌达5.0×10 CFU/mL,酵母菌达1.0×108 CFU/mL。8
本实用新型的目的是提出一种浓香型白酒发酵窖池,该种浓香型白酒发酵窖池可以减少起糟时对窖泥的损伤,从而提高窖池酿造功能的稳定性和基酒的质量。本实用新型的具体结构如下:窖池的窖底铺设有硬质地砖,窖池的窖壁固定有硬质墙砖,所述地砖及墙砖均由窖泥烧制而成;地砖均匀设有顶部开口的凹坑;所述墙砖内设有中空腔体,所述腔体的上部设有朝向窖池中部方向的开口;所述凹坑及腔体内均盛装有窖泥;所述地砖在凹坑的旁侧设有与窖底相通的地砖透气孔;所述墙砖在腔体上方设有与窖壁相通的墙砖透气孔,所述墙砖透气孔的底端与腔体的顶部连通,且墙砖透气孔由下至上逐渐向窖壁方向倾斜。
实验以生淀粉糖化酶活力为考察指标,采用单因素实验结合正交设计探索SP7-2固态发酵产生淀粉糖化酶优化工艺.结果表明,麸皮为基质,复配20%(质量分数)豆饼粉,料水比1∶1.1(g∶mL),添加0.3%(质量分数)植酸,初始pH自然,每24 h翻抛1次,双控温培养60 h.上述条件下,30 L固态发酵罐中生淀粉糖化酶活力为7 870 U/g,是优化前的1.31倍.该结果为生料酒曲的制备及生料酿酒提供了一定的实验数据及理论指导.
为提高酿酒酵母合成番茄红素能力,从底盘宿主种类、功能基因拷贝数、启动子种类等方面综合考虑,优化番茄红素合成途径与酿酒酵母底盘宿主间的适配性.结果表明,以酿酒酵母CEN.PK2-1C为宿主,采用多拷贝质粒pRS42K为载体,使用组成型启动子控制番茄红素合成途径表达时,番茄红素合成水平显著提高,产量比初始菌株提高了约70倍,达到3.62 mg/L,表明改善外源代谢途径与酵母底盘间的适配性是提高目标产物合成的有效手段.

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