脂肪酸碳链延长酶与脱饱和酶在酿酒酵母中共表达

为了利用转基因技术在酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中生产二十二碳六烯酸(DHA,22∶6A4,7,10,13,16,19n-3),构建了同时含C20-△5脂肪酸碳链延长酶(TFD5)和C22-△4脂肪酸碳链脱饱和酶(FAD4)基因的共表达质粒pYTFD5-FAD4.该质粒是通过基因重组的方法,使脂肪酸碳链延长酶与脱饱和酶基因置于各自启动子和终止子下获得的.共表达质粒pYTFD5-FAD4转化酿酒酵母所得到基因工程菌,在添加终质量分数为2%的半乳糖,终体积分数为1%的NP-40和0.3 mmol/L的底物二十碳五烯酸(EPA,20∶5△5,8,11,14,17n-3)下进行诱导,可直接转化二十碳五烯酸(EPA,20 ∶ 5△5,8,11,14,17n-3)生成二十二碳五烯酸(DPA,22 ∶ 5△4,7,10,13,16n-3)和二十二碳六烯酸(DHA,22 ∶ 6△4,7,10,13,16,19n-3).
[目的]筛选优质早籼糯品种酿制绍兴加饭酒.[方法]采用传统绍兴加饭酒酿制方法和工艺技术,以常规晚粳糯为时照,对越糯6号、越糯05-38、越糯05-53和早粳糯进行绍兴加饭酒酿制试验,筛选出适宜的旱籼糯品种.[结果]参试品种酿酒各阶段理化指标正常.清酒品评表明越糯05-38、早粳糯和对照风味好,口味清爽、醇厚,酒体协调,主要理化指标均符合GB17946～2000<绍兴酒(绍兴黄酒)>的标准要求.生产应用表明选用早籼糯米酿酒,可拓宽黄酒原料糯米的市场,有利于提高早稻种粮效益,降低酿酒成本,促进粮食转化.[结论]越糯05-38、早粳糯适合酿制绍兴加饭酒.
本试验旨在研究临武鸭对几种糟渣类原料(白酒糟、啤酒糟、2种酱油渣、灵芝菌糠、柑橘渣和甘蔗糖渣)的养分利用率和代谢能,及添加复合酶制剂(蛋白酶、纤维素酶和木聚糖酶)对几种糟渣类原料养分利用率和代谢能的影响.试验选用48只体重2.0 kg左右的健康成年临武鸭公鸭,随机分为8组,每组6个重复,每重复1只鸭.采用绝食强饲-全收粪法进行代谢试验,将待测原料与无氮饲粮按1:2的重量比混合配成试验原料,每种原料均设对照组和添加复合酶制剂组(试验原料中添加250 mg/kg的复合酶制剂),对照组和添加复合酶制剂组的试验分2个批次进行,测定添加复合酶制剂对临武鸭几种糟渣类原料养分利用率和代谢能.结果表明:临武鸭对几种糟渣类原料的干物质(DM)、粗蛋白质(CP)、粗脂肪(EE)和粗纤维(CF)表观利用率分别为30.73%~51.08%、17.65%~75.62%、10.85%~91.19%和10.84%~67.05%,表观代谢能(AME)和真代谢能(TME)分别为4.58~15.20 MJ/kg和5.57~17.17 MJ/kg.添加复合酶制剂后临武鸭对几种糟渣类原料的DM、CP、EE和CF的有效营养改进值(ENIV)分别为6.46~41.37 g/kg、0.33~13.23 g/kg、0.09~9.73 g/kg和0.70~7.84 g/kg,TME提高了0.13~1.68 MJ/kg.由此可见,添加复合酶制剂能够一定程度地提高临武鸭对糟渣类原料的养分利用率和代谢能.
在玉门市潮化灌淤土上进行的啤酒大麦氮肥施用方式试验研究结果表明,在基施五氧化二磷180 kg/hm2的条件下,施氮总量为180 kg/hm2,其中2/3基施、1/3头水时追施,啤酒大麦的产量最高,为8 614.5 kg/hm2.
采用PCR技术从S.cerevisiae TCCC 31012菌株的染色体DNA中扩增得到S-腺苷甲硫氨酸合成酶-2基因(sam2),将sam2克隆到酿酒酵母表达载体pACT2的强启动子PADHI控制下,以构建高效表达质粒,并在酿酒酵母亮氨酸缺陷型茵株YS58中表达.重组质粒经鉴定含有sam2基因.工程菌YS58-2表达产物经SDS-PAGE,结果显示重组菌S-腺苷甲硫氨酸合成酶的分子质量约为43ku,经凝胶电泳扫描,表达带约占菌体总蛋白的14%.YS58-2菌株培养72 h的SAM合成酶活力为16.5 U/mg茵体蛋白,较出发菌S.cerevisiae TCCC 31012提高了40.3倍,较受体菌YS58提高了32倍.
利用PCR介导基因中断技术,以pUG6为模板,设计含有与flo8基因两侧序列同源的长引物,构建带有卡那抗性基因（KanMX）中断盒,转化啤酒酵母G-03,获得一株转化菌G-03/f8。对转化菌G-03/f8和原菌G-03进行生理生化性能和摇瓶发酵性能比较。该菌株在实验室常规发酵中,生理性能、发酵性能基本上与出发菌株保持一致。当用酵母提前絮凝（PYF,premature yeast flocculation）值高的麦芽糖化后的麦汁接种发酵时,G-03/f8的絮凝性能与常规发酵下的絮凝性能基本一致,此时明显优于出发菌株G-03。G-03/f8的酒精度、发酵度等低温发酵指标与常规发酵相比有小幅度的下降,但明显高于此时G-03的各项发酵指标。相对于出发菌而言,G-03/f8对高PYF值的麦汁不敏感,能够保持较好的发酵性能,因此在高PYF值麦芽的利用上有良好的应用前景。