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利用定点突变改变树干毕赤酵母(Pichia stipitis)木糖醇脱氢酶辅酶特性的研究

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2023-06-08 阅读:169
在酿酒酵母中同时表达木糖还原酶基因(xyl1)和木糖醇脱氢酶基因(xyl2)可使酿酒酵母利用木糖发酵生成乙醇.但由于两种酶所依赖的辅酶不同导致酿酒酵母细胞内氧化还原失衡,致使中间产物大量积累,降低了乙醇产率.本研究从树干毕赤酵母中克隆了木糖醇脱氢酶基因,通过与银叶粉虱山梨醇脱氢酶[其活性依赖NADP+(H)]序列进行对比,确定突变位点,并利用融合PCR的方法进行定点突变.结果表明,突变体对辅酶NADP+(H)的亲和力有不同程度的提高,其中三点突变体的辅酶特性得到明显改变.本研究为构建高效利用木糖发酵生成乙醇的重组酿酒酵母奠定了基础.
系统介绍了啤酒大麦新品种扬农啤10的选育经过及各世代的表现,在江苏省大麦中间试验中扬农啤10号的产量表现,扬农啤10号的籽粒品质和麦芽品质。根据扬农啤10号在江苏省大麦中间试验的表现及栽培试验结果,总结扬农啤10号的特征特性和栽培技术要点。
为了研究离子液体在全细胞生物催化中的作用,有必要考察离子液体对微生物活性的影响.本文以啤酒酵母为实验菌种,通过测定酵母菌的生长量、糖代谢效果、生理活性,观察菌落状态、菌体细胞壁等方法,探讨不同浓度[Bmim][PF6]离子液体处理对酵母活性的影响.结果表明:[Bmim][PF6]离子液体对酵母菌的生长有抑制作用,但离子液体对酵母菌的致死效果微弱,与超临界CO2、高浓度苯甲醇处理会导致绝大多数酵母菌死亡的效果截然不同.
高山被孢霉中Δ6脱饱和酶(MaFADS6)是决定ω3/ω6多不饱和脂肪酸代谢流的关键酶.利用定点突变技术研究MaFADS6-I一级结构与功能的关系,为高山被孢霉多不饱和脂肪酸的合成提供了理论依据.利用非链取代式质粒扩增技术对已构建质粒pYES2/NT C-MaFADS6-I内的表达单元(即MaFADS6-I)中细胞色素b5区(HPGG)下游的位点进行定点突变,将所有突变体分别转化酿酒酵母进行诱导表达,进一步通过在培养基中添加Δ6脱饱和酶的底物来考察重组菌对各底物的催化作用.实验结果表明,所有突变体催化α-亚麻酸(ALA)的活性没有改变;K61和D68两个位点对催化亚油酸(LA)起关键作用,其对应的4个突变体对LA的转化率分别为(6.2±0.5)%(K61T)、(0.3±0.0)% (K61F)、(8.2±0.7)% (D68N)和(6.6±0.8)%(D68L),相比原始转化率各降低50%以上;G63和T69两个位点对LA的催化无直接影响,但G63T突变体由于突变位点极性改变,其对LA的转化率为(8.5±0.9)%,比原始转化率降低了49.9%;而V66位点的突变体对LA的转化率分别为(22.3±2.6)% (V66T)和(20.7±2.5)% (V66A),比原始转化率分别降低了36.1%和37.8%.确定了MaFADS6-I氨基酸序列中K61和D68两个关键氨基酸位点经突变后均会使其酶活明显降低,这为研究MaFADS6-I一级结构与功能的关系提供了理论依据.
在啤酒酵母中,液泡发挥了重要的生理作用,包括pH调节和代谢控制、蛋白质降解、氨基酸以及无机离子的储存.这一系列的功能均依赖于液泡中一些特定的蛋白酶.酵母细胞内大多数酶的成熟均依赖于这些蛋白酶的加工修饰作用.近年来国外研究人员对蛋白酶的这种加工修饰作用进行了深入研究,但在国内尚不多见.本文依据国内外研究进展对啤酒酵母液泡中常见的几种蛋白酶生物特点及其生理功能进行了综述,以便更好地认识酵母蛋白酶,为进一步研究打下理论基础.
探讨了甘啤6号啤酒大麦的微型制麦工艺.结果表明,适宜甘啤6号的最佳制麦工艺为:浸麦阶段42 h,采用4个浸4断6,最后浸2的浸麦方式,浸麦度达到44%左右,露点率大于85%;发芽阶段120 h,温度采用低一高-低,发芽旺盛期浸麦度不超过49%,发芽后期停止增湿,加大回风量,降低绿麦芽含水量,减少玻璃质的形成,同时防止麦芽徒长;干燥阶段19.0 h,即50℃(4.0 h)→55C(2.0 h)→60℃(2.0 h)→65℃(2.5h)→70℃(2.0 h)→75℃(2.5 h)→83℃(3.0 h)→45℃(1.0 h).

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