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马尔尼菲青霉氧化应激反应相关基因SKN7的克隆及功能研究

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2023-06-12 阅读:254
目的:克隆双相真菌马尔尼菲青霉(PM)的氧化应激反应相关基因SKN7,并通过对酵母SKN7缺陷株的互补试验证明该基因是氧化应激反应相关基因.方法:提取PM标准株DNA及RNA后,通过简并PCR结合RACE技术克隆PM的SKN7基因;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)比较该基因在25℃及37'C温度下的表达;将该基因的cDNA插入酵母表达载体pY-ES2.0,转化酿酒酵母SKN7基因缺陷株,比较互补后酿酒酵母SKN7基因缺陷株对H2O2的抵抗能力是否增强.结果:PM的SKN7基因全长约2.5 kb,开放读码框为1 776 bp,推测编码592个氨基酸;包含4个内含子5个外显子及两个高度保守的结构域.该基因在双相温度表达量无变化,互补试验证明转化PM的SKN7基因后酿酒酵母SKN7基因缺陷株重新具有抵抗H2O2:杀伤的能力.结论:PM的SKN7基因是氧化应激反应相关基因,但并不是酵母相特异表达基因.
以磨盘柿子为原料,考察野生型及基因型为PDE1/Δpde1、Δpde1/Δpde1、PDE2/Δpde2和Δpde2/Δpde2的环核苷酸磷酸二酯酶基因缺失的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)发酵过程中可溶性固形物、总糖、乙醇体积分数和pH值等基本理化指标,总酚和总黄酮等活性物质以及2'-联氨-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力和总还原力等抗氧化能力的变化;并采用顶空固相微萃取技术与气相色谱-质谱联用相结合的方法,对不同菌株发酵的磨盘柿果酒挥发性物质成分进行比较分析.结果表明,在12d达到发酵终点,4株突变体发酵速率均比野生型快,其中Δpde2/Δpde2菌株的发酵速率最快;4株突变体菌株酿造的磨盘柿果酒中总黄酮含量和抗氧化能力均高于野生型菌株,Δpde2/Δpde2菌株酿造的磨盘柿果酒抗氧化功效最强.PDEs基因缺失菌株与野生型酿酒酵母酿造的磨盘柿果酒中的风味物质种类差异不大,PDE2/Δpde2菌株酿造的磨盘柿果酒中酯类相对含量较高.
为提高菜籽粕的饲用营养价值,采用固态分步发酵技术对其进行处理,并利用正交试验优化工艺参数。从8种微生物菌株中筛选3种菌先进行有氧发酵,优化的工艺参数为:酿酒酵母、乳酸菌、枯草芽孢杆菌配比2:1:1,接种量1.5%,发酵温度36℃,料水比1:1,发酵时间3 d;在有氧发酵的基础上用乳酸菌进行厌氧发酵,优化的工艺参数为:接种量0.5%,33℃下发酵3 d。在优化工艺条件下,得到的发酵菜籽粕中多肽、总酸、粗蛋白的含量分别提高了348.19%、255.28%、7.45%,硫甙、ITC、OZT、粗纤维、植酸分别降解了48.19%、26.92%、92.86%、1.35%、14.73%,单宁含量略有提高。
大麦是啤酒生产的主要原料,控制好大麦质量和制麦质量是保证啤酒质量的关键.在选用一个品种大麦制麦时,首先要了解其品种特性,包括育种过程、农业特性、制麦特性和酿造特性等.
为了优化啤洒糟蛋白水解液脱色工艺,并使其得到更好的应用,考察了不同的脱色剂对脱色效果的影响,并通过正交试验优化了活性炭脱色条件.结果表明:颗粒状活性炭脱色效果较优;在活性炭脱色试验中脱色率和肽氮类物质的损失率的变化与各影响因素都表现为正相关;各因素对于脱色率的影响顺序为:添加量>脱色温度>脱色时间;对于肽氮类物质损失率的影响顺序为:添加量>脱色时间>脱色温度.较优的脱色条件为添加4%的颗粒状活性炭50%下脱色2.5h,脱色率达到36.72%,肽氮类物质损失率为20.96%.
采用二级浸泡玉米的方法,通过亚硫酸氧钠与酿酒酵母共同作用,来提高淀粉的产率.通过单因素试验确定一级浸泡玉米的工艺条件为亚硫酸氢钠溶液质量浓度0.15g/mL、乳酸质量浓度0.3g/mL、浸泡时间10h、浸泡温度50℃;二级浸泡玉米工艺条件为浸泡温度40℃、浸泡时间24h、亚硫酸氢钠质量浓度0.1g/mL、5%(V/V)酿酒酵母接菌量.此浸泡工艺大大缩短生产周期,降低了淀粉生产的成本.

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