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重组植物AHA2蛋白的真核表达及纯化

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2023-06-21 阅读:589
AHA2蛋白位于植物细胞质膜上,该蛋白在原核蛋白表达体系中无法重组表达.已经报道的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达体系操作复杂,成本高昂.本文将拟南芥aha2基因(全长2984bp)插入真核表达载体pPICZα A中,线性化质粒pPICZαA-aha2,电转化毕赤酵母X33细胞,通过同源重组获得工程菌.以0.5%甲醇诱导表达72 h后,收获细胞.冷冻研磨细胞,离心并收集上清进行亲和层析和分子筛纯化.SDS-PAGE分析结果显示,目的蛋白为97kD的条带.本研究成功的在毕赤酵母X33细胞中实现了拟南芥AHA2蛋白的表达和纯化.
改进检测白酒中氨基甲酸乙酯含量的气相色谱-质谱法(GC-MS).样品经二氯甲烷提取,用旋转蒸发仪浓缩至近干,乙腈溶解,正已烷去除杂质,然后用气相色谱-质谱联用法检测.氨基甲酸乙酯标准浓度在0.1~1 mg/L范围内,线性关系良好,相关系数r达0.999.添加浓度为0.01~0.1 mg/kg时,回收率为77.7%~95.2%,相对标准偏差(RSD)在4.0%~6.3%之间,定量检出限低于0.01 mg/kg.改良后的GC-MS法操作简单快速、经济节约、灵敏度高.
本发明公开了一种酒壶式白酒瓶。包括材质为玻璃或陶瓷的瓶体和瓶颈,还包括瓶盖和内盖,本发明的主要特点是:瓶体的右端设有一体成型的壶嘴,瓶体的左端设有对应的一体成型的把手;壶嘴的进酒口与瓶体右下端的通孔相通,壶嘴的出酒部内设有与出酒部的内壁之间紧接触的内塞,内塞沿轴向设有若干个出酒小孔,出酒部的外螺纹与外盖的内螺纹二配合联接,圆形密封片采用强粘胶胶粘固定在外盖内的底端。本发明既能盛装白酒,又能作为酒壶使用,实现节约资源的目的。
通过干燥的方法使酵母细胞脱水并进入休眠状态即固态活性干酵母,其储运方便,且可长期保存,广泛应用于酿酒、烘焙、生物防治等方面.在制备活性干酵母的过程中菌体干燥是一个重要环节,文章介绍了成本低、可行性高、能够长时间保存且能耗小的真空干燥、喷雾干燥、流化床干燥等热干燥方法的原理及应用进展;分析了整个热干燥过程前后影响活性干酵母活性的相关因素,包括酵母自身对外界环境的耐受力、酵母培养条件、保护剂添加、干燥工艺条件、贮藏及复水条件等;并进一步论述了提高其活性的方法.
采用雪梨和枇杷作为原材料,探讨雪梨枇杷复合果酒主发酵的最佳工艺条件.以酒精度、pH、总酸、透光率、还原糖和感官评价为指标,通过单因素实验和正交试验确定雪梨与枇杷体积比、酵母接种量、SO2添加量,对成品进行微生物指标的测定,并且利用顶空固相微萃取结合GC-MS分析雪梨枇杷果酒中挥发性成分种类以及相对含量.结果 表明,以雪梨和枇杷为原料进行发酵,雪梨枇杷体积比为6∶4,发酵原浆初始pH为3.5,SO2添加量为80 mg/L,酵母接种量为0.4 g/L,5d发酵结束后,得到果酒酒精度为9.51% vol,透光率达到91.5%,总酸为7.60 g/L,pH为3.56,还原糖为8.32 g/L,在此工艺条件下发酵果酒感官评价得分为91分,各因素对果酒酒精度影响次序为:初始pH>酵母接种量>雪梨枇杷体积比> SO2添加量.并且测得该雪梨枇杷复合果酒的菌群总数为11 CFU/mL以及大肠菌群数小于10-9 MPN/mL,均符合标准.通过分析其挥发性成分,雪梨枇杷果酒共检测出30种挥发性化合物,相对含量较高的为醇类和酯类,占总挥发性成分的87.82%,对果酒的香味起着积极作用.
本研究应用模糊数学的"隶属函数"描述不同啤酒口感协调性特征,通过隶属度确定其质量等级.很大程度克服了以往简单评分法给结果造成的主观性和片面性,具有较高的准确性和公正性,使评定结果更趋于合理性和实用性,为啤酒质量稳定与提高提供保障.

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