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球形芽胞杆菌S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的克隆和表达

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2023-06-26 阅读:682
根据S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)基因核苷酸序列的保守性,利用苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)基因组中SAMS序列信息设计引物.通过PCR扩增出球形芽胞杆菌(Bacillus sphaericus)SAMS基因,插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pGEX-6P-1,获得重组质粒pGEX-SAM.序列分析表明,来自球形芽胞杆菌的SAMS与大肠杆菌(K02129)、枯草芽胞杆菌(U52812)、酿酒酵母(U17246)、小鼠(J05571)和人(BC018359)的SAMS基因,分别有63.9%、75.4%、58.8%、59.1%和55.7%的同源性.由于一级结构存在明显的差异,将该重组的质粒转入大肠杆菌DH5α并成功地表达了SAMS.通过亲和层析纯化出球形芽胞杆菌的SAMS,SDS-PAGE分析显示蛋白分子量为43 kD.HPLC对SAMS的活性分析表明,该酶可催化ATP和蛋氨酸形成S-腺苷甲硫氨酸(SAM).
为了探究不同温度条件下酿酒废糟干式厌氧消化系统表现及微生物群落结构差异,以酿酒废糟为原料,运行中温(37℃)和高温(52℃)干式厌氧消化反应器,研究产沼气效果及微生物群落的动态变化.结果表明,中温和高温条件下酿酒废糟沼气回收率分别达到了理论产沼气体积的41.32%和42.97%.中温系统中残留挥发性有机酸可以在31 d消耗完毕,而高温系统存在挥发性有机酸积累的风险,44 d才能将残留挥发性有机酸完全消耗.通过分析微生物群落结构发现,在细菌属水平上,高温系统中Defluviitoga和Clostridium优势显著,中温系统中Petrimonas优势显著.中温和高温系统厌氧发酵过程中产甲烷群落均由乙酸营养型产甲烷菌(Methanosar-cina)向氢营养型产甲烷菌(Methanoculleus)转变,但产甲烷菌种类和丰度存在明显差异.
通过筛选确定混合菌组成为:绿色木霉、白地霉和酿酒酵母三株混合发酵生产蛋白饲料.培养基组成为玉米秸秆粉与麸皮1:1混合,%(NH4)2SO4.原料:水为1:1.2,H5.5,接种量10%,0℃,培养周期5 d.发酵终产物粗蛋白含量为28%,其中氨基酸种类齐全,某些必需氨基酸如苏氨酸、赖氨酸、缬氨酸比发酵前分别提高143%,15%及55.4%,粗纤维含量降低57.6%.
酿造啤酒所用的原料主要是大麦麦芽,而我国国产大麦的产量远远满足不了我国啤酒工业发展的需要,每年都要从国外进口很多大麦.同时,我国又是小麦产量最多的国家.使用小麦酿造啤酒,可以充分利用我国丰富的小麦资源,增加农产品的附加值.使用小麦酿制啤酒,有一定的优势,如啤酒泡沫丰富、挂杯持久、口感纯正、营养丰富.可以充分利用我国小麦的资源优势,解决我国大麦资源不足,降低生产成本,提高企业的市场竞争力,促进啤酒技术的发展,解决啤酒原料短缺的问题,为啤酒原料的国产化奠定基础.
为进一步探究高压脉冲电场(PEF)对酿酒酵母的灭菌机理,初步研究了PEF处理下亚致死损伤酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的修复条件采用酵母浸出粉、蛋白胨和葡萄糖缓冲溶液作为模拟酿酒酵母的培养修复环境,通过选择性培养基与非选择性培养基对PEF(20kV/cm,400μs,15℃)处理前后亚致死酵母细胞进行菌落计数,结果显示PEF作用下亚致死酿酒酵母于三种模拟体系下可在30~70min内完成修复,在酵母浸出粉复杂模拟体系中修复速度最快.通过在pH7.2的磷酸盐缓冲液(PBS)模拟体系和实际食品体系(鲜草莓汁)添加K+、Ca2和Mg2离子,结果表明在模拟和实际体系中添加金属阳离子对均会产生不同的修复效果.
从酵母的营养与有效成分入手,全面回顾了近年来国内外利用废啤酒酵母开发食用营养酵母、分离蛋白,肽、氨基酸等新蛋白资源产品,生产酵母抽提物功能性调味品,以及提取β-葡聚糖、甘露聚糖、海藻糖、SOD、谷胱甘肽等功能活性物质方面的研究动态和进展,阐述了对废啤酒酵母资源综合利用的重要性.

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