异常维克汉姆酵母的乙酸苯乙酯合成途径

以福建红曲黄酒酿造用曲中分离得到的异常维克汉姆酵母为试验菌株,采用发酵过程跟踪法和诱变法相结合,研究该酵母菌的乙酸苯乙酯合成途径.结果表明:该菌在发酵过程中同时存在醇酰基转移酶合成途径和酯酶合成途径,发酵过程跟踪法显示底物乙酸与乙酸苯乙酯的相关性大,说明酯酶合成途径是合成乙酸苯乙酯的主要途径.通过诱变法得到发酵力相同、醇酰基转移酶酶活不变、酯酶合成酶活力和水解酶活力下降的异常维克汉姆酵母突变菌株.该突变菌株发酵结果显示产乙酸苯乙酯水平显著下降,表明酯酶合成途径是合成乙酸苯乙酯的主要途径.通过确定异常维克汉姆酵母对黄酒风味有显著影响的乙酸苯乙酯合成途径,为以分子生物学技术为手段改良和优化酿酒酵母提供酶学基础,也为定向改进黄酒风味和滋味提供科学导向.
构建重组真核表达质粒pVT102U/α-bgln使之可以在酿酒酵母中表达以获得β-葡糖苷酶,用于提高从植物中提取白藜芦醇的得率.以含有从黑曲霉中获得的编码β-葡萄糖苷酶(bgln)成熟肽的cDNA的克隆质粒pMD19T-bgln为模板,用PCR的方法扩增β-葡糖苷酶基因片段(bgln),利用真核表达载体pVT102U/α构建pVT102U/α-bgln重组质粒,PCR结果显示扩增片段约2.6kb,与预期相同.用酶切电泳验证重组结果的正确性,重组质粒酶切后显示其大小约10kb,大小及酶切图谱与预期相同.测序检测质粒重组后序列情况,经测序发现插入片段两端序列无改变,且读码框正确.pVT102U/α-bgln质粒构建成功.
本实用新型涉及一种白酒存储库房，包括外墙体、装设在外墙体上的第一通风窗、组设在外墙体角落的通风角墙、由外墙体围设形成的存储空间及装设在所述通风角墙上的第二通风窗，所述通风角墙与外墙体围设形成通风角室，所述外墙体呈蜿蜒状设置且所述通风角墙呈圆弧形设置，所述白酒存储库房依靠自然通风且通风良好。
对宁夏玉泉营地区葡萄圃内的50多个品种和砧木的卷叶病自然发病情况进行调查研究,结果表明:在美洲种群、东亚种群中没有发现卷叶病症状;欧亚种群的品种卷叶病症状比例最高,且程度严重;具有欧亚血统的欧美杂种、欧山山葡萄杂种均有表现卷叶病的品种,但发病率、严重度低于欧亚种.欧亚种中,以鲜食品种为主的东方品种比以酿酒品种为主的西欧和黑海品种卷叶病发病率低.检测结果表明不同酿酒品种带毒率有差异.
利用PCR方法扩增钙调蛋白依赖性激酶(CaM-dependent kinase 2)基因的蛋白质编码序列,经限制性内切酶Kpn I和BamH I酶切后连接入空载体pYES2/NTA构建真核表达载体,构建的pYES2/NTA-cmk2转化酿酒酵母菌株BY4741进行真核表达.经诱导和收集细胞后,对酵母细胞用玻璃珠震荡破壁,收集上清液进行镍离子亲和层析,并纯化CMK2,纯化的蛋白通过免疫杂交检测.并且初步研究了CMK2在酵母细胞氧化胁迫应答中的作用.
首先通过在18°P超高浓麦汁中对燕京酵母YJ0002进行定向驯化,确定适应该浓度生长的出发菌株,经过2-脱氧-D-葡萄糖梯度培养、抗性平板分离初筛以及复筛,采用高通量法筛选出2株抗葡萄糖阻遏效应的适于高浓酿造的啤酒酵母,并进行100 L微酿啤酒发酵实验,测定其发酵性能指标.实验结果表明:驯化代数为C8的菌株对数期酵母数和酵母细胞活性良好,确定其为出发菌株;与初始菌株YJ002相比,驯化菌株菌落大,且细胞形态饱满,经高通量筛选后优良菌株G2和G9可耐受高达13％的酒精浓度,在18°P 100 L微酿发酵中,发酵初期酒精含量提高10.52％和14.24％,发酵速率提高10.96％和15.11％,分别缩短发酵时间42 h和50 h,发酵度提高了6％和7％,且驯化菌株G2和G9生产的啤酒表现出较低浓度的乙酸乙酯和适宜浓度的高级醇,啤酒的口感较YJ0002有了显著的改善.