黑曲霉ATCC1015催化16α,17α–环氧黄体酮11α–羟基化及相关P450基因诱导表达

为了定向遗传改造黑曲霉菌种,研究了黑曲霉(Aspergillus niger)ATCC1015转化甾体16α,17α–环氧黄体酮活性.转化产物经过薄层层析(TLC)、高效液相色谱(HPLC)以及氢谱、碳谱分析最终确定为11α–羟基–16α,17α–环氧黄体酮.确定了黑曲霉ATCC101511α–羟基化活性受底物16α,17α–环氧黄体酮的诱导.鉴于真菌的甾体羟化酶属于细胞色素P450酶,从黑曲霉ATCC1015的P450(CYP)基因数据库中筛选出57个具有编码甾体羟化酶潜力的CYP基因;利用实时荧光定量PCR确定了2个受甾体底物高度诱导的候选目标甾体羟化酶基因AnA100和AnA154.分别构建了AnA100基因和AnA154基因的重组酿酒酵母菌株pYES2-AnA100和pYES2-AnA154,甾体转化结果显示重组酵母菌pYES2-An100能够转化16α,17α–环氧黄体酮生成11α–羟基–16α,17α–环氧黄体酮.
以酿酒酵母为原料,利用TRIZOL试剂快速提取法,得到的总RNA不完整,只有5s rRNA一条条带,经过对该试剂盒的改进后提取的总RNA呈现28s rRNA,18s rRNA和5s rRNA三条清晰的条带,很少有降解,其A260/A280值可达1.946,A260/A230值为2.070,具有很高的纯度.
以青岛啤酒酵母和高浓酵母为供试菌株,通过原生质体融合得到融合子.对融合子利用铜抗性初筛,利用耐压和发酵性能为指标进行实验室和100 L发酵复筛,并对融合子进行鉴定及遗传稳定性实验.结果表明:通过原生质体融合选育出的高浓菌株与青岛啤酒酵母菌株相比,表现出酵母数峰值高、降糖和还原双乙酰快的优势,且代谢风味物质组成与青岛啤酒酵母接近;经过连续使用8代后,其总染色体DNA指纹图谱保持一致,证明该菌株的遗传稳定性高.
本发明涉及一种白酒窖泥的培养方法，其包括以下制备步骤：将菌种经过分离、筛选、纯化培养后，选育产己酸能力较强、活力较强的梭状芽孢杆菌备用；本发明所述方法制备的白酒窖泥各项指标均符合标准要求，且活菌数能够达到70万个每克，可以产生香产酯微生物的代谢产物，适合生产出优质的白酒。
本发明公开了一种螺旋式白酒蒸馏单元，包括甑桶和冷凝器，甑桶和冷凝器之间采用蒸汽管道相连，冷凝器包括位于上端的蒸汽缓冲腔和位于下端的冷凝液集液腔，蒸汽缓冲腔与冷凝液集液腔之间设有冷凝单元，蒸汽管道与蒸汽缓冲腔相连，冷凝液集液腔的底部设有冷凝液出液管；冷凝单元包括螺旋式冷凝管，螺旋式冷凝管包括分别与蒸汽缓冲腔和冷凝液集液腔相连的两根冷凝直管，两根冷凝直管之间连接有螺旋冷凝管，且螺旋式冷凝管外套装设有冷凝介质管，冷凝介质管与冷凝直管对应设有冷凝介质直管、与螺旋冷凝管对应设有螺旋介质管，靠近冷凝液集液腔一侧的冷凝介质直管上设有冷凝介质入口，靠近蒸汽缓冲腔一侧的冷凝介质直管上设有冷凝介质出口。
以棕榈酸乙酯为主要诱导物研究了白酒中絮状物的形成对白酒特性的影响,测试了不同酒精浓度及温度条件下,乙醇-水-棕榈酸乙酯等三元体系沉淀前后的荧光强度及电导率变化.结果表明,体系沉淀前后的电导率变化趋势为:沉淀后的电导率值上清液＞沉淀前＞空白组;不同酒精浓度下体系沉淀前后的荧光强度变化为:空白组＞沉淀上清＞沉淀前.实验表明白酒中有机絮状物的形成同时受温度和酒精浓度的双重影响,且沉淀的形成对酒体特性产生的影响显著.