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木糖利用融合子D2的制备与乙醇发酵特性

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2023-06-30 阅读:299
以树干毕赤酵母(Pichia stipitis)1960(Ps1960)与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)AADY(ScAADY)为亲本菌株,采用双亲灭活原生质体技术制备木糖利用融合子,并对其制备条件进行了优化.优化后的原生质体制备条件为Ps1960采用2%蜗牛酶和1%纤维素酶在28℃酶解45min,20W紫外灯距离10cm照射3min灭活;ScAADY采用1.5%蜗牛酶和1%纤维素酶28℃酶解50min,55℃水浴50min灭活;均采用0.6mol/L山梨醇为渗透压稳定剂.在该条件下,共得到22株融合子.通过测定各融合子在不同培养基条件下的生物量来评价其木糖代谢和乙醇耐受能力,最终获得能利用木糖高效发酵产乙醇、遗传性状稳定的融合子D2,并进行乙醇发酵条件优化.结果表明,在混合糖质量分数8%、木糖和葡萄糖质量比6∶1、5%接种量、30℃、160r/min 、培养72h条件下,融合子D2发酵产乙醇的产量为40.58g/L.
科技创新是提高国家综合实力和推动社会进步的主要动力,也是农业产业化的根本出路.因此,在啤酒大麦产业中,新品种研发是科技创新中最为活跃的因素, 而开展啤酒大麦新品种、新技术的研发正是从科技创新上将公平竟争机制引入产业化、规范化、标准化生产经营领域,以加快优良新品种、新技术的创新和推广应用,促进啤酒大麦产业化信息技术、生物技术与传统的老品种及技术相结合.实现啤酒大麦增产、增收、增质,促进成果转化,有效地推动啤酒大麦产业升级, 加强啤酒大麦新品种、新技术的研发和增创品牌意识,促进其产业化自主研发创新.
一种测定白酒中硫化物的方法,属于白酒风味分析技术领域,本发明用顶空固相微萃取与气相色谱—脉冲式火焰光度检测器联用技术对白酒中的硫化物进行定性定量分析。本发明建立的方法能够快速检测并准确定量白酒中的硫化物,定量限可低至0.01μg/L,线性相关性系数R<SUP>2</SUP>均大于0.98,相对标准偏差小于20%,在酒中的回收率为80%-100%。顶空固相微萃取技术无需有机溶剂,在常温范围内就能完成,避免某些化学性质活泼的硫化物分解,能有效地富集白酒中的硫化物;脉冲式火焰光度检测器专一检测硫化物,排除了其它物质的干扰,大大提高了结果的准确性。本发明为进一步研究硫化物的形成机理提供了基础,对提高白酒品质有着重要意义。
利用简并PCR和TAIL-PCR从嗜热特异腐质霉Humicola insolens Y1中克隆得到一个新的耐热型木聚糖酶基因xynD.该基因全长l 104 bp,共编码367个氨基酸,不含有内含子,N端的22个氨基酸为信号肽.成熟蛋白在毕赤酵母中进行了重组表达,重组蛋白经超滤和离子交换柱纯化后达到电泳纯.对其酶学性质分析表明,XynD的最适pH为6.0,在pH 4.0~7.0可以保持80%以上的酶活性,在pH 5.0~10.0具有良好的pH稳定性.最适作用温度为70℃,在60℃条件下保持稳定.多数金属离子对XynD酶活力没有明显的影响.麦芽汁降解实验表明,XynD与商用β-葡聚糖共同作用可以提高麦芽的过滤速率(45.7%)并降低粘度(8.1%).因此XynD在酿酒业,特别是啤酒制造业具有潜在的应用价值.
以废啤酒酵母为原料,根据实验室条件及试验要求,采用研磨法、冻融法、微波法、超声波法破碎废啤酒酵母细胞壁。利用紫外分光光度计测定上清液中可溶性蛋白质的含量为标准,来评价不同破壁方法对细胞内含物的释放程度。为进一步探索经济、高效的废啤酒酵母的破壁方法提供理论依据。结果表明,废啤酒酵母细胞破壁效果为超声波法﹥微波法﹥冻融法﹥研磨法。
本研究分别以芽孢菌类、 酵母菌类、 乳酸菌类为主,对豆粕进行不同类型的发酵,观察不同种类微生物对豆粕发酵效果的差异.嗜酸乳杆菌进行现场预发酵,发酵液调制到活性菌体数为109 CFU/mL,枯草芽孢杆菌和酿酒酵母直接用水调制到同样的菌体浓度.豆粕按料水比2:1进行调制,分别在20℃和37℃条件下接种上述微生物进行固态发酵.结果表明,接种芽孢类微生物的发酵豆粕小分子蛋白质含量最高,发酵程度最好,但存在霉菌超标风险;接种乳酸菌类微生物则使发酵豆粕具有特殊的酸香味,有助于提高动物采食量;接种酵母类微生物时需特别注意发酵时间和温度的控制,以免发酵后豆粕酒味过浓,影响发酵豆粕的营养价值.综合试验结果,养殖场现场发酵饲料时应根据固态发酵目的,尽量复配多种益生的微生物,并根据季节和气温条件,严格控制发酵时间,以获取最佳发酵效果.

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