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水蛭素变异体I基因的合成及其在酵母中表达的初步研究

来源:酒旗网  作者:酒小旗   2023-06-18 阅读:721
目的将水蛭素基因转入酵母系统中进行表达,以评价人工合成基因在真核系统中表达的可行性和探讨影响表达水平的因素.方法根据水蛭素变异体1(HV1)的氨基酸序列,选择酿酒酵母偏爱的密码子,设计了HV1基因.将HV1基因分12个寡核苷酸片段,进行人工合成,并连接成一个完整的水蛭素基因.经PCR扩增后,将扩增产物连到克隆载体pBS-SK(+)上并进行DNA序列分析.用正确的HV1基因与酵母α因子信号肽基因相连,并一起插入酵母表达载体pYC-DE,经鉴定表明,获得正确的重组表达质粒.将后者转入酿酒酵母BJ1990细胞进行初步表达.结果在筛选出的阳性克隆的培养上清中,检测出的水蛭素活性为30抗凝血酶单位(ATU)/ml.所表达的量高于HV2在酵母中和HV1在原核系统的表达水平.N末端氨基酸序列与天然水蛭素一致.结论采用人工合成的HV1基因和较强的启动子在酵母中进行表达是一较好途径.
本发明提供了一种酱香型白酒类沉香酒及其制备方法,包括按照重量份数配制的如下组分:酱香型白酒90?93份、沉香酒母液7?10份;所述沉香酒母液由重量为沉香木90?110倍的酱香型白酒浸泡沉香木而成。本发明提供的酱香型白酒类沉香酒,能有效的将沉香中的香气及药理成分浸泡于酒中,具有麻醉、止痛、镇静、止喘、降压的作用,能提高人体免疫力,是一种保健酒。该沉香酒,酱香突出、沉香优雅、醇和丰满、回味悠长,没有药酒苦涩的口感。本发明提供的酱香型白酒类沉香酒的制备方法,采用先用部分白酒浸泡沉香木制备沉香酒母液,然后再勾兑的方法,该方法有利于保存酒香和中药香,具有工艺简单、易于实现,且配比合理等优点。
本发明属于食品加工领域,尤其涉及一种白酒籼米散曲的制备方法,应用于小曲白酒生产领域,在白酒酿造过程中主要起糖化、发酵作用,其特征在于:包括以下步骤:淘洗、浸泡、分装三角瓶、蒸米、冷却、接种、恒温培养和摇瓶、贮存:当米粒表面张满菌丝,米粒微微泛黄时即成,保存。本发明具有操作简单、使用方便、酶活力高、劳动强度低、易实现机械化生产等优势。
[目的]研究利用蛹虫草发酵液制取虫草保健啤酒的生产工艺过程及发酵液生物活性物质检测方法,为虫草保健啤酒的工业生产提供参考.[方法]首先筛选出合适的蛹虫草菌株,然后以蛹虫草一次发酵液与麦芽汁混合培养基作为发酵培养基,在30 L发酵罐中采用单罐低温发酵方法,接着检测发酵液理化、感官指标以及应用HPLC法检测生物活性物质.[结果]该虫草啤酒的理化和感官指标均达到国家标准,其中酒精、总酸、双乙酰、真正发酵度分别达到4.6%vol、1.8 mg/100 ml、0.02 mg/g、71%;获得了富含虫草生物活性成分的虫草保健啤酒.当发酵周期为240 h时,发酵液中腺苷和虫草素含量达到最高,分别为122.3和11.8 μg/ml;发酵周期为144 h时,甘露醇含量达到最高,为19.75 mg/L.[结论]该发酵方法可以使虫草啤酒各项指标均达到国家标准,并且赋予了啤酒虫草生物活性物质.
陶质酒器作为仰韶文化中一类重要的物质遗存,按器形可以分为:釜、灶、鼎、甑、盆、大口缸、滤酒器、瓮罐、尖底瓶、漏斗、盉、壶、杯、异形器;按功能可以分为:酿酒器、贮酒器、宴饮酒器;按性质可以分为:礼仪用器、非礼仪用器。陶质酒器的发展变化,反映出仰韶文化早期社会的饮酒礼仪尚处在萌芽期,饮酒行为简单朴素,反映了社会相对平等,阶层分化不明显;仰韶文化中、晚期社会发展趋于复杂化,并受外来文化的影响,仰韶文化社会中的饮酒礼仪初具雏形。
RAVE(regulator of the H+-ATPase of the vacuolar and endosomal membranes)复合物由Ravl p,Rav2p和Skplp 3个亚基组成.将酿酒酵母中的rav2基因克隆到表达载体pETDuet-1中,构建重组质粒pETDuet-R2,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.通过IPTG诱导,SDS-PAGE分析重组菌在诱导后表达出目的蛋白.目的蛋白经Ni-NTA凝胶纯化后再经质谱进一步验证确定为酿酒酵母的Rav2p蛋白.目前国际上还没有有关Rav2p的结构和性质以及RAVE亚基之间相互关系的研究.重组质粒pETDuet-R2的成功构建以及Rav2p的可溶性表达为研究RAVE亚基之间的相互作用以及V-ATP酶的活性调节机理打下基础.

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