毕赤酵母分泌表达SAMS及表达产物活性分析

[目的]利用毕赤酵母分泌表达S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS).[方法]以酿酒酵母(Saccharomyce cerevisiae)基因组DNA为模板,通过PCR扩增出S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因2(sam2),构建重组毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K-sam2,转化毕赤酵母GS115,以甲醇诱导表达分泌蛋白SAM合成酶,并用HPLC测定重组蛋白的酶活力.[结果]经SDS-PAGE鉴定重组蛋白分子量约50 kD,比理论值42.5 kD稍大,可能是分泌过程中糖基化等加工造成.体外酶促反应结果显示,伴随甲醇诱导及初步纯化过程的进行,蛋白活力逐步提高,纯化后比活力为61.48 U/mg.[结论]该研究首次实现了SAM合成酶的胞外表达,为开发和建立体外酶促法生产SAM工艺奠定了基础.
为提高自然成像条件下的酿酒葡萄图像中病害识别的可靠性,对时序叶片图像作连续病害检测并监测病斑变化情况.首先,在每一天利用Faster R-CNN算法对摄像机视场中葡萄叶片进行检测,对检测到的叶片采用改进卡尔曼滤波法进行跟踪,以获得叶片正面图像.为了实现多叶片跟踪和解决由遮挡而造成的跟踪失败问题,该文在卡尔曼滤波和匈牙利算法基础上,结合运动测度和深度外观信息对跟踪目标进行匹配,运动匹配时采用马氏距离,外观匹配方面采用最小余弦距离.其次,将不同日期的叶片正面图像做SIFT(scale-invariant feature transform)匹配,找到同一叶片按日期排列的一组序列图像,并在序列图像中通过深度学习技术进行病害识别.最后,通过监测叶片序列图像上病斑相对面积变化或病斑数量是否增加来确认病害的存在.该文对提出的跟踪算法、叶片匹配算法和序列图像上病害识别的精度进行了测试,试验表明:跟踪算法平均多目标跟踪准确度为73.6％,多目标跟踪精度为74.6％,基于判别模型颜色特征的传统跟踪算法两指标分别为14.3％和61.3％;基于SIFT特征的叶片匹配在识别同一叶片时的精度达到了90.9％;病害监测方面,虚警综合排除率(马修斯相关系数)达到了84.3％.该文的方法可以排除一些虚假病害,病害监测的可靠性有所提高,可适用于自然条件下葡萄病害的连续在线监测.
以菌株酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae YDJ05及产香酵母Issatchenkia orientalis YS03为融合亲本X和Y,通过原生质体融合技术构建适合梨酒酿造的酵母工程菌,研究结果表明:利用EMS诱变亲本菌株Y,得到了一株精氨酸营养缺陷型菌株,亲本菌株X和Y采用蜗牛酶液在35℃下处理100min,得到菌株X、Y的原生质体融合率分别为93.6％、94.2％,再生率分别为27.8％、31.6％.以加热的方式灭活亲本菌株X,灭活时间为14min.在以PEG为促融剂的条件下对两株菌进行原生质体融合,经过优选得到融合子D J02,其产酒精率、产香率等指标最优,分别达到了9.87％、0.37g/L.
实用新型公开了一种白酒灌装装置，涉及白酒生产设备领域，提供一种灌装量准确的白酒灌装装置。白酒灌装装置包括酒桶、量杯、活塞、输入酒管、输出酒管、输入阀、输出阀、活塞移动装置、控制装置和排气管；活塞设置于量杯内部，活塞与量杯的侧壁密封，活塞、量杯的底面和量杯的侧壁之间形成的空间为储酒空间；活塞移动装置驱动活塞沿量杯的轴线移动；输入酒管两端分别与酒桶内部和储酒空间连通；输出酒管一端与储酒空间连通，另一端为灌酒口，排气管与输出酒管连接；输入阀和输出阀分别设置于输入酒管和输出酒管上；控制装置控制活塞移动装置、输入阀和输出阀。本实用新型可用于白酒灌装，也可应用于其它液体的罐装中。
一种区分清香型原浆与液态法白酒及固液法白酒的比率型荧光方法，属于荧光光谱技术领域。由于荧光光谱中，各样品的主荧光发射峰分别位于308纳米、330纳米和373纳米。我们将其分别指认为(H2O)(EtOH)n(外疏水而内亲水的团簇)、(H2O)m(EtOH)n(混合型团簇)和(H2O)m(EtOH)(外亲水而内疏水的团簇)三种团簇。本发明基于荧光强度330/308和荧光强度330/373的比值与1的大小关系来区分清香型原浆(均大于1)与液态法白酒(均小于1)以及固液法白酒(一个大于1，一个小于1)。本发明采用的方法，具有检测速度快、操作简便，体系简单、信号稳定、灵敏度高、无需任何预处理，除简单的荧光光谱仪以外无需复杂的检测仪器。所以此方法对于区分清香型原浆与液态法白酒及固液法白酒有非常广阔的应用前景。xa0xa0
菜油甾醇作为甾体药物 (孕酮、雄烯二酮、氢化可的松等) 的重要合成前体已受到国内外研究学者的广泛关注。首先通过生物信息学分析，筛选了10种不同来源的7-脱氢胆固醇还原酶DHCR7，并采用CRISPR/Cas9基因编辑技术将酿酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 内源的ERG5基因替换成不同来源的DHCR7基因，构建了菜油甾醇合成菌株。结果发现整合来源于Pangasianodon hypophthalmus DHCR7的菌株Zw507表现出最高的菜油甾醇的产量216.93mg/L。进一步筛选了10种酵母内源启动强度较强的启动子来与PhDHCR7基因进行组合，结果显示以TEF1p为启动子时菜油甾醇的产量最高可达253.35mg/L。为了进一步提高菜油甾醇产量，增加了DHCR7表达盒在酵母基因组上的拷贝数。当拷贝数为3个时，菜油甾醇的产量达到最高302.27mg/L。最终，通过5L发酵罐进行补料分批发酵，实现了916.88mg/L菜油甾醇产量。该菌株可作为后续甾体药物生物合成的优良底盘细胞。