利用增强型绿色荧光蛋白研究不同启动子在乳酸克鲁维酵母中的功能

以增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)为报告基因评价不同启动子在乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)中的转录功能,寻找高效表达外源蛋白的启动子.以改造后载体pKLAC1*为基础,PCR克隆来源于K.lactis、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和Spathaspora passalidarum中7个不同的启动子,采用重叠延伸PCR分别与egfp融合后插入pKLAC1*,Bst XI线性化重组表达载体后电转化K.lactis GG799获得重组菌,利用特异性引物PCR扩增法快速筛选获得不同启动子调控下的单拷贝整合重组菌,通过定性和定量分析绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,比较不同启动子的转录活性.荧光显微镜观察结果表明,K.lactis来源的pKladh4、pKlmal22,S.cerevisiae来源的pScgal7、pScgpd1,S.passalidarum来源的pSpmal1、pSpmal6、pSpgal1均成功调控EGFP的表达.荧光分光光度计定量测定结果表明,重组菌在pKladh4、pScgal7、pScgpd1调控下荧光强度分别为2.82、2.92和4.74,且在相应的诱导条件下转录能力分别提高了13%、57%和22%,均高于当前应用最广泛的强启动子pKllac4(荧光强度为2.13).探究了不同来源启动子在K.lactis中的功能,pKladh4、pScgal7、pScgpd1具有高效起始转录能力,其中pScgpd1在K.lactis中的应用为首次报道.
本发明涉及一种养生保健白酒的生产方法与养生保健白酒及其用法，属于酿酒技术领域，生产方法为：以重量份计，取山楂、枸杞、木瓜、茯苓、乌梅、苦参、葛根、板蓝根、五味子、五加皮、伸筋草、菟丝子、麦冬、冰糖粉碎后添加至白酒中，搅拌均匀并在45～75℃条件下加热，过滤后将滤液转移至橡木容器中自然冷却至室温，灌装至陶瓷容器中即得到养生保健白酒；该酒酒质透明，气味芳香纯正，入口绵甜爽净，酒精度数达到45～60度；其用法为直接饮用或与纯净水混合均匀后饮用或与纯净水在45～75℃条件下混合均匀并冷却后饮用；本发明方法操作简单方便、适合大规模生产；产品稳定性好、适宜长期存放，养生保健效果显著；用法多样，可满足不同人群的需求。
应用高效液相色谱法测定啤酒中的乙基麦芽酚。样品用水稀释后，以水和甲醇为流动相梯度洗脱，经C18色谱柱分离，用VWD检测器检测。乙基麦芽酚的质量浓度在(2.0～50)μg/mL范围内与其峰面积呈线性关系，测定下线（10S/N）在1.0～3.0之间。方法对乙基麦芽酚的回收率为95.8%，相对标准偏差（n=6）小于6%。
本发明公开了一种固态小曲白酒常减压蒸馏方法，通过在常规蒸馏系统上增加抽真空设备，并对常规蒸馏系统结构进行密封和耐负压优化改造，从而实现固态小曲白酒减压蒸馏。在馏酒过程中分段先进行常压蒸馏、再进行减压蒸馏。本发明不仅提高了原酒总酸总酯含量，还降低了醛杂味，总体提升了固态小曲白酒的质量和档次。
为了使酿酒酵母较好地利用木糖产生乙醇,将来自Thermus thermophilus的木糖异构酶基因XYLA和酿酒酵母自身的木酮糖激酶基因XKS1,构建到酵母表达载体pESC-LEU中,导入酿酒酵母YPH499中,同时成功表达了两种酶基因.该菌以木糖为唯一碳源进行限氧发酵,木糖的利用率为9.64%,为宿主菌的4.17倍,产生2.22 mmol·L-1的乙醇.同时初步探讨了两种酶基因的表达量对酿酒酵母发酵木糖生成乙醇的影响.木糖异构酶对木糖的利用起关键性的作用,木酮糖激酶的过量表达不利于乙醇生成.
本发明提供了一种白酒的处理方法，属于原酒生产和γ辐射工艺技术领域。本发明选用浓香型、酱香型、清香型、兼香型、米香型原酒为原料，在不添加任何化学物质的情况下，采用适合的工艺技术，在⁶⁰Co-γ工业辐照装置γ辐射环境中，辐照适宜的剂量，提升原酒品质。本发明处理技术工艺简单，不需加温，辐照前不需对原料进行特殊处理，处理后的原酒品质提升1～3个等级，达到6个月～2年的陈化效果，且原基酒内微量的有害成分相对减少，在提高原酒价值的基础上亦提升了白酒的饮用健康系数。