利用酵母随机展示技术对猪肺炎支原体P97上B细胞表位的筛选和鉴定

构建猪肺炎支原体P97蛋白的酵母随机展示文库,并利用该文库筛选和鉴定P97蛋白上的特异性B细胞表位.设计特异性引物从Mhp基因组中扩增p97基因,通过PCR方法将基因内部的TGA密码子突变为TGG,用DNase I将p97突变基因随机消化成长度100～250 bp的片段,回收产物经3’端加A处理后与用Xcm I酶切的酵母表达载体pCT-Xcm I连接,将连接产物转化酿酒酵母EBY100获得P97蛋白酵母随机展示文库.利用流式细胞分选技术筛选出文库中能与Mhp天然感染的猪阳性血清结合的阳性酵母克隆,并进一步鉴定其最小抗原表位.结果:1)克隆计数显示构建的随机文库库容量为2.86×10 6克隆,所有插入的片段随机分布,覆盖了全长的p97突变基因,文库经诱导后可以利用流式细胞仪检测到与Mhp天然感染的猪阳性血清反应的阳性克隆;2)随后对文库进行流式细胞分选,经鉴定选出184号一个抗原多肽.从短肽C端氨基酸逐个缺失后发现长度为15个氨基酸的184D(DEKTSSQKDPSTLRA)多肽为一个B细胞表位,该表位能与多份Mhp阳性猪血清反应.P97蛋白酵母随机展示文库可以用于抗原表位的筛选鉴定,184D多肽是P97上一个在宿主体内能普遍诱导抗体免疫应答的B细胞表位,本研究对于研发Mhp的表位疫苗和建立特异性诊断方法具有重要意义.
利用优选酵母混菌发酵,是改善葡萄酒品质及增香的有效途径.以赖氨酸培养基、WL培养基和产酶筛选培养基为基础,分析了昌黎4个葡萄园土样中产酶酵母的多样性,结果表明,该地区产酶酵母丰富,50％的产酶酵母能同时产2种或2种以上的酶.对产酶酵母酿造因子耐性分析表明,菌株GY1、M9和J24具有高糖耐性,适合于高糖低醇果酒酿造;菌株GY13和M9具有高酒精耐性,酒精含量为15.000％时活性较强;菌株J24和GY1具有高酸耐性,pH 2.5时具有较高活性;7株菌15℃时具有较高活性.综合分析发现,菌株M9(Torulaspora delbrueckii)同时产β-葡萄糖苷酶、果胶酶和纤维素酶,除酸耐性较差外,具有高糖、高酒精度和低温耐性,在高糖低醇果酒酿造中具有很大应用潜力.
为探讨冷榨花生粕蛋白质酶法制备蛋白胨替代商用蛋白胨的可行性,将冷榨花生粕用胃蛋白酶与碱性蛋白酶进行双酶协同水解制备冷榨花生粕蛋白水解物(也称为冷榨花生粕蛋白胨),并分析其分子质量分布、化学组分分析及氨基酸组成.研究发现,经双酶协同水解后的冷榨花生粕蛋白胨主要由小于5.0 kDa的肽段组成,富含丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸等氨基酸,特别是谷氨酸含量较高.微生物增殖培养实验结果表明,大肠杆菌在冷榨花生粕蛋白胨培养基中培养8h后比牛肉膏蛋白胨中生长情况好;枯草芽孢杆菌在冷榨花生粕蛋白胨培养基中比LB培养基中有较长的滞后期,但培养8h后,生长情况比LB培养基更好;大肠杆菌和枯草芽孢杆菌在冷榨花生粕蛋白胨培养基和对照培养基中pH值变化差异不显著(P＞0.05);干酪乳杆菌在冷榨花生粕蛋白胨培养基和MRS培养基中生长情况有显著差异(P＜0.05);金黄色葡萄球菌在冷榨花生粕培养基中与对照培养基生长差异不显著(P＞0.05);酿酒酵母在冷榨花生粕培养基中与对照生长有类似的生长曲线与pH值变化趋势;米曲霉在冷榨花生粕培养基中与对照培养生长无显著差异(P＞0.05).结果 表明,冷榨花生粕蛋白胨在替代商用蛋白胨用于微生物的增殖培养应用中具有很好的潜力.
本文以江苏省育成和引进的6个大麦品种为材料,研究参试品种不同施氮水平和不同氮运筹方式对产量影响的差异性。结果表明：江苏省现有啤酒大麦产量存在遗传差异,合理的氮肥用量和运筹方式对产量影响较大,所有参试品种中,以苏啤3号产量为最高,其次为扬饲麦3号和扬农啤2号。
利用PCR技术扩增出啤酒工业酵母QY的羟酸还原异构酶基因ILV5,在酵母YS58中表达时,羟酸还原异构酶活力提高2～3倍.将ILV5基因与铜抗性基因插入到YEp352载体中得到重组质粒pLZ-5C,转化QY,通过铜抗性筛选转化子,所得转化子的羟酸还原异构酶的活力明显高于对照菌株QY,在发酵测试中,转化子产生双乙酰的量比原始菌株降低了60%.
本发明公开了一种兼香型白酒，包含以下重量份的原料：糙米65～75份、高粱15～25份、小麦8～12份、酒曲饼种1.5～2.5份、干酵母2.5～12份以及水140～160份；所述原料还包含糖化酶，相对于每克糙米、高粱和小麦的混合物，所述糖化酶的用量为120～280U。本发明还公开了所述兼香型白酒的制备方法。本发明的兼香型白酒具有原料丰富、色清透明、米香和清香兼而有之、绵甜爽口、饮后舒适的优点。